918博天堂提供的人前列腺癌细胞VCAP的培养说明书，详细介绍了细胞培养的条件和步骤，确保用户能高效、安全地操作和维护细胞。

一、细胞培养条件

VCAP细胞的培养环境要求为37℃、5% CO2的培养箱。正确的培养基和无菌操作是成功培养细胞的重要基础。

二、细胞收到后的处理

接收细胞后，首先应使用75%酒精对细胞瓶进行消毒。随后将其置于超净台内进行严格的无菌操作。对于细胞的培养，向瓶中灌入完全培养液并封紧瓶口是运输细胞的最佳方式。在细胞稳定状态下，将其放入37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时，再开始后续操作。通过显微镜观察细胞的生长情况，并在40x、100x、200x下分别拍摄保存不同倍数的照片，前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认为收到状态良好。

在进行传代时，建议将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。在更换培养液时，应将瓶盖稍微拧松，以保持细胞的良好状态。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留出5ml的完全培养基，在37℃、5% CO2的孵箱中继续培养。当细胞密度超过80%时，进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，待细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台，轻敲培养瓶并加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，向沉淀细胞中加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，将沉淀用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新的完全培养基以继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行1000 RPM的离心处理，收集上清以进行过渡培养。然后加入1-2ml的胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再加入完全培养基终止反应。在进行离心并更换培养基后，按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

如果细胞出现问题，以下情况可重发：

1. 细胞在运输途中丢失、瓶身破损或培养液严重泄露。
2. 在收到产品48小时内提供真实的实验结果，核实后重发。
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片。
4. 细胞收到当天及第2、3天拍照，3天未告知的视为产品合格。
5. 出现问题的情况下需提供收到细胞前3天照片及详细操作步骤，由技术人员核实后处理。

918博天堂致力于提供高质量的细胞培养服务，确保用户的实验顺利进行。如有任何问题，请及时与我们联系。