HepG2细胞系是一种具有上皮-like形态的细胞，来源于一名15岁阿根廷白人男性的肝细胞癌。该细胞系由Wistar研究所提供，适用于转染实验，具备良好的生长特性和生物学功能。HepG2细胞能够分泌多种重要的血浆蛋白，包括清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原和铁传递蛋白等，广泛用于研究肝细胞功能及病毒模型。

HepG2细胞通常表现为贴壁生长，在培养瓶中初期以小岛状结构附着，随着时间推移可能出现多层堆积或悬浮状态。该细胞群体的生长特征使其成为研究肝脏疾病和生物标志物的理想选择。常见的生物标志物包括胰岛素和胰岛素样生长因子II（IGFII）。

对于细胞培养，建议使用包含87% MEM（不含非必需氨基酸）和10%高品质进口胎牛血清的培养基。补充1% L-alanyl-L-glutamine、1%丙酮酸钠及1%抗生素双抗，以确保细胞在37℃、95%空气和5% CO2环境中得到最佳生长。

细胞传代步骤

为了实现HepG2细胞的有效传代，请遵循以下步骤：

1. 一旦发现细胞脱落，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3-5分钟），收集悬浮细胞。
2. 轻柔去除培养基后，PBS洗涤贴壁细胞，随后添加胰酶进行消化，观察细胞状态。
3. 细胞变圆且大部分脱落后，立即加入完全培养基以终止消化。
4. 转移细胞悬液至无菌离心管中，计数并调整细胞密度，重新接种于培养瓶中。

细胞冻存及复苏

在细胞密度达到80%以上且活细胞比例超过95%时，可进行冻存。使用低温冻存液重悬细胞后，分装并放置于-80℃过夜，随后转移至液氮中保存。

细胞复苏时，将冻存管迅速解冻后进行消毒，转移至培养基中并轻轻混匀，随后离心去除火冻存液，重悬并计数细胞，最后接种至新的培养瓶中。

常见问题及解答

在HepG2的培养过程中，细胞可能出现碎片、空泡现象、培养生长缓慢或细胞聚集等问题。这些情况通常与培养条件、血清质量及细胞密度密切相关。建议使用高质量的低内毒素胎牛血清，以保持细胞的贴壁性。同时，细胞的培养环境应定期检查，确保pH值处于适宜范围。

对于细胞生长缓慢的问题，可以适当增加血清浓度以推动细胞的生长。对于漂浮细胞过多的情况，使用台盼蓝检测细胞活性，如果其活性依然良好，则可以通过离心收集后重新接种。

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截至2024年，引用关于HepG2细胞的文献总计达到72篇，影响因子总和达到46707，进一步证明了该细胞在科学研究中的重要性和广泛应用。