ELISA定性测定的结果判断主要着眼于受检标本中是否存在待测抗原或抗体，结果可简单归为“有”或“无”，通过“阳性”和“阴性”来表示。其中，“阳性”表明该标本在测定系统中出现反应，而“阴性”则表示没有反应。此外，通过定性方法也可以获得半定量结果，反应的强度可用滴度表示，虽然其本质仍是定性试验。在半定量测定中，通过对标本进行系列稀释后进行实验，阳性反应的稀释度即为滴度。滴度的高低可以帮助判断标本反应性的强弱，这种方法比观察未稀释标本的颜色深浅要更具定量意义。在间接法和夹心法的ELISA中，阳性孔的颜色通常比阴性孔深，而在竞争法ELISA中则相反，阴性孔则表现得更深。

### 1. 间接法和夹心法

间接法和夹心法的定性结果可以通过肉眼进行判断。无色或接近无色的标本会被判定为阴性，而呈现明显显色的标本则被认为是阳性。然而，在ELISA实验中，正常人血清的反应后可能会出现本底色，这种本底色的深浅因试剂成分和实验条件的不同而异。因此，实验中必须加入阴性对照，阴性对照应为不含受检物质的正常血清或类似物。在目测结果时，建议以显色深于阴性对照作为标本阳性的指示。虽然目测法简捷明了，但存在一定的主观性，因此在条件允许的情况下，应使用比色计来测定吸光值，以获取更为客观的数据。

在使用比色计时，需先读取标本（S）、阳性对照（P）及阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。其计算方法有多种，主要分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。

#### a. 阳性判定值

阳性判定值（cut-off value）通常为阴性对照A值加上一个特定的常数，作为判定结果阳性或阴性的标准。此方法要求实验条件高度稳定，试剂需标准化，阳性和阴性对照品需满足特定规格，并严格遵守操作规程。例如某款检测HBsAg的试剂盒中，阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品的HBsAg含量为P=9±2ng/ml。每次实验需设立两个阳性对照和三个阴性对照，在测得A值后，计算阴性对照的平均值（NC X）和阳性对照的平均值（PCX），两者的差（P-N）必须大于特定值（如0.400），实验才有效。当三个阴性对照A值均应≥0.5×NCX且≤1.5×NCX，若有一个超出范围则需剔除，并重新计算NCX; 若两个超出范围，则该实验无效。最后，阳性判定值计算为：阳性判定值=NCX+0.05，标本A值＞阳性判定值的为阳性，反之为阴性。需要注意的是，这里的0.05为该试剂盒的常数，只适用于特定条件。

#### b. 标本/阴性对照比值

在实验条件（包括试剂）不易保持恒定的情况下，标本与阴性对照比值法是一种较为适合的判断方法。在得到标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N比值。为了避免混淆，建议使用S/N来表述。在早期的间接法ELISA中，有些作者设定S/N为阳性标准，现今多种测定也沿用这种方式。实际上，每种测定系统应根据实验结果确定各自的S/N阈值。需要特别注意的是，N代表的阴性对照不含受检物质的人血清。

### 2. 竞争法

在竞争法ELISA中，阴性孔的颜色比阳性孔深。其呈色强度取决于反应中结合物的酶浓度及竞争抑制物的加入量，通常调整阴性对照的吸光度在10-15之间以保持反应的灵敏度。由于肉眼难以辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，因此在此类方法中通常使用比色计进行测定，读取S、P和N的吸光值。其计算方法主要有两种，即阳性判定值法和抑制率法。

#### a. 阳性判定值法

竞争法中的阳性判定值法与间接和夹心法大致相同，但计算公式中会引入阳性对照A值。例如，某检测抗HBc的试剂盒中，阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆，阳性对照的抗HBc含量为125±100u/ml。每次实验也需设置两个阳性对照和三个阴性对照，测得A值后，先计算阴性对照A值的平均数（NC X）和阳性对照A值的平均值（PCX），两者的差（N-P）必须大于某个特定值（例如0.300）才能保证实验有效。阴性对照A值应小于2000且始终在0.5×NCX和1.5×NCX之间。阳性判定值的计算公式为：阳性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，标本A值≤阳性判定值的反应为阳性，反之为阴性。

#### b. 抑制率法

抑制率表示标本在竞争结合中对阴性反应显色的抑制程度，其计算公式为：抑制率（%）=（阴性对照A值 - 标本A值）÷阴性对照A值。一般规定，抑制率≥50%为阳性，＜50%为阴性。

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