实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是多发性硬化（MS）研究中最为经典的动物模型，能够有效模拟自身免疫性T细胞对中枢神经系统（CNS）的攻击，从而重现MS的关键病理特征，包括神经炎症、脱髓鞘和神经功能障碍等。EAE模型广泛应用于MS发病机制的研究、神经免疫调节药物的筛选（如918博天堂的Roflumilast）、以及髓鞘修复和神经保护疗法的开发。

为了支持EAE模型的研究，918博天堂凭借其专业的研发能力与严格的质量控制体系，开发出一整套高稳定性、高重复性的EAE模型试剂组合，具体优势包括：

• ✅现货速发：百日咳毒素国内现货，极高纯度（99%）及性价比。
• ✅高发病率：C57BL/6小鼠于免疫后10-14天内稳定发病（临床评分2-4分）。
• ✅良好的病理重现性：明确的髓鞘脱失（LFB染色）和Th17细胞浸润（流式细胞术验证）。
• ✅多维度评价体系：支持临床评分、行为学、组织病理学和分子生物学的全面验证。

### EAE模型核心试剂

1. **免疫原（抗原）**：MOG₃₅₋₅₅（髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段），来源于人工合成的肽，模拟MS中的自身抗原，通常使用浓度150-300μg/只小鼠（可溶于PBS、生理盐水或CFA中）。

2. **佐剂**：完全弗氏佐剂（CFA），成分为矿物油和灭活结核分枝杆菌（如Mycobacterium tuberculosis H37Ra，浓度为4-5mg/mL），用于增强免疫应答，并与MOG₃₅₋₅₅乳化后使用。

3. **免疫增强剂**：百日咳毒素（PTX），剂量为200-500ng/只小鼠（腹腔注射），在免疫当天（Day0）及第2天（Day2）进行注射，作用是破坏血脑屏障，促进T细胞浸润中枢神经系统。

### EAE模型诱导方法

1. **实验准备**

实验动物通常选用6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠，每组至少需要10只动物。确保动物在实验环境中适应1周，并保持温度、湿度和光照的稳定。试剂需将MOG₃₅₋₅₅肽溶解于生理盐水中，并与等体积的CFA混合乳化。

2. **EAE诱导**

第0天：准备乳剂，将300µg MOG₃₅₋₅₅肽与300µl CFA混合乳化后，分两次（每侧100µL）皮下注射于小鼠双侧腋窝、腹股沟及背部，同时腹腔注射200ng PTX。

第2天：再次腹腔注射200ng PTX。

### EAE模型验证

验证EAE模型需通过临床评估、行为学、组织病理学及分子生物学等多维度进行。

1. **临床评分验证**

• 使用0-5分量表进行标准化评分：从第0天开始观察30天或更长时间，0分为无症状，5分为死亡。
• 监测体重变化：EAE小鼠通常会伴随体重下降（10%提示模型成功），每日记录，如体重持续下降需进行伦理干预。

2. **行为学检测**

• 运动功能评估：可通过转棒实验（Rotarod）和步态分析（CatWalk或足印法）进行。
• 抑郁样行为检测：采用强迫游泳实验和悬尾实验辅助验证抑郁表型。

3. **组织病理学验证**

• 取材与处理：用4%多聚甲醛灌注固定脊髓和脑组织，制备石蜡切片或冷冻切片。
• 染色方法：HE染色评估炎性细胞浸润，LFB染色检测髓鞘脱失等。

4. **分子生物学验证**

• 通过流式细胞术进行细胞亚群分析，检测细胞因子的ELISA/液相芯片。
• 使用qPCR和Western Blot分析细胞因子的mRNA表达和蛋白质水平。

### 模型成功标准

基础标准为发病率达到80%（临床评分≥2），且病理确认有炎性浸润和髓鞘脱失；高级标准包括行为学异常和分子标志物显著变化。

### 常见问题与解决方案

对于EAE模型中出现的问题，918博天堂提供有效的解决方案，例如：如无临床症状，可能是CFA/PTX失效，可尝试更换试剂批次并提高PTX剂量。

### 应用案例

在东南大学医学院，张志珺教授团队利用EAE大鼠模型研究Roflumilast的作用，结果显示该药可能在改善MS抑郁症状及急性运动障碍方面有潜力，并为MS与抑郁症的发病机制提供了重要线索。

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